隨著我國(guó)飼料工業(yè)的發(fā)展，魚粉的需要量逐年增加，魚粉的質(zhì)量問(wèn)題越來(lái)越引起飼料行業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)的重視。魚粉是水產(chǎn)飼料的主要蛋白源，尤其含有動(dòng)物生長(zhǎng)所必需的氨基酸，由于魚粉用量大，價(jià)格高，有些廠家摻雜使假、以次充好，使魚粉質(zhì)量參差不齊，這一行為業(yè)給魚粉品質(zhì)分析帶來(lái)了一定困難。因此，有必要建立一個(gè)有效的手段對(duì)魚粉中氨基酸進(jìn)行定量分析。

魚粉圖片

以下是賽智科技利用LC-10Tvp高效液相色譜儀對(duì)魚粉進(jìn)行的HPLC檢測(cè)方案。

     （本應(yīng)用方案請(qǐng)勿轉(zhuǎn)載，侵權(quán)必究）

1、儀器與試劑

    1.1儀器、設(shè)備

    LC-10Tvp高效液相色譜儀

    Vertex 色譜柱AA：250mm×4.6mm×5μm

    分析天平

    恒溫箱，溫度控制在110±1℃

    微量進(jìn)樣器，（20μL）一支

    漩渦混勻器

    氮吹儀

    針頭過(guò)濾器

    微孔濾膜：0.45μm

    1.2試劑

    鹽酸溶液，6mol/L:將優(yōu)級(jí)純鹽酸與水按1:1(V/V)混合。

    氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

    乙腈，色譜純。

    三水合醋酸鈉，優(yōu)級(jí)純。

    冰醋酸。

    正己烷，色譜純。

2、供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備   取氨基酸混合工作標(biāo)液500ul，用水稀釋至5ml，即得。

供試品溶液的制備   稱取試樣50-100mg（準(zhǔn)確至0.1mg）于據(jù)塞試管中，加入6.0mol/l鹽酸10ml，混勻，充分提取10min，蓋緊蓋子。將樣品置于110℃恒溫干燥箱中，水解22-24h。冷卻后充分混勻，過(guò)濾。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求移取適量上清液，60℃下氮?dú)獯蹈桑瑐溆?。以下按照衍生方法包進(jìn)行。

方法包衍生方法：將恒溫水浴鍋預(yù)熱至50±1℃，分別將A、B兩種衍生試劑用稀釋至原來(lái)濃度的1/5倍。精密量取上述對(duì)照品1ml，至于試管中，加入稀釋后的A溶液0.5ml和稀釋后的B溶液0.5ml，搖勻；在50±1℃的水浴中加熱45分鐘，取出，加入正己烷溶液1ml，振搖；并用孔徑為0.45μm有機(jī)膜過(guò)濾，放置30min后，取澄清的下層液進(jìn)行分析實(shí)驗(yàn)。供試品的衍生步驟與對(duì)照品相同。

3、色譜條件

　  色譜柱：AA  4. 6 mmx250 mm，粒度5 μm

    流動(dòng)相：

    流動(dòng)相A：0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH6.5）：乙腈=93:7

    配置方法：準(zhǔn)確稱取三水合醋酸鈉13.6g于1000ml水中，攪拌均勻，溶解，用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5； 準(zhǔn)確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液465ml和乙腈35ml，混合均與，抽濾，過(guò)0.45μm濾膜。

    流動(dòng)相B：水：乙腈=20:80。

    配制方法：準(zhǔn)確量取水100ml和乙腈400ml，混合均勻，抽濾，過(guò)0.45μm濾膜。

    波長(zhǎng)：254nm

    流速：1. 0 mL/min

　  梯度設(shè)置：

4、測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得

5、譜圖